測(cè)定樣品中各種游離氨基酸含量,可以除去脂肪雜質(zhì)后,直接上柱進(jìn)行分析。
測(cè)定蛋白質(zhì)的氨基酸組成時(shí)樣品必須經(jīng)酸水解,使蛋白質(zhì)完全變成氨基酸后才上柱進(jìn)行分析。 經(jīng)過(guò)處理后的樣品上柱進(jìn)行分析。上柱的樣品量根據(jù)所用自動(dòng)分析儀的靈敏度來(lái)確定。一般為每種氨基酸0.1μmol 左右(水解樣品干重為0.3mg 左右)。測(cè)定必須在pH5~5.5、100℃下進(jìn)行,反應(yīng)進(jìn)行時(shí)間為10~15min,生成的紫色物質(zhì)在570nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行比色測(cè)定。而生成的黃色化合物在440nm 波長(zhǎng)下進(jìn)行比色測(cè)定。做一個(gè)氨基酸全分析一般只需1h 左右,同時(shí)可將幾十個(gè)樣品一起裝入儀器,自動(dòng)按序分析,最后自動(dòng)計(jì)算給出精確的數(shù)據(jù)。儀器精確度在±1~3%。用陽(yáng)離子交換柱分離及測(cè)定氨基酸所得